ЛЕКЦИЯ 18 ПЕСТИЦИДЫ А

ЛЕКЦИЯ 18 ПЕСТИЦИДЫ А царь тем ядом напитал Свои послушливые стрелы И с ними гибель разослал К соседям в чуждые пределы. А. С. Пушкин

Клинические проявления: Повышается содержание ядовитого ацетилхолина, подавляется активность холинэстеразы. Симптомы: общая слабость, усталость, адинамия. • Головная боль, шум в ушах. Провалы в памяти. Расстройства сознания, речи. • Потеря аппетита. Тошнота, многократная рвота. Спазмалитические доли в животе. • Характерно обильное слюнотечение, потливость ладоней, холодный пот на лбу. Лицо отёчное. Слезотечение. И т. д. • Причиной смерти является, в основном, паралич дыхательного центра.

Физические свойства • твердые кристаллические вещества, бесцветные или желтовато-коричневые, часто маслянистые жидкости. • Специфический запах у каждого (чеснока). • Хорошо растворимы в органических растворителях, плохо в воде. • Водой гидролизуются, (в щелочной среде гидролиз ускоряется). • Когда необходимо уничтожить, обрабатывают щелочью.

• ФОС способны подавлять активность холинэстеразы (ХЭ) во всех органах и структурах, прежде всего в ЦНС. • Проникают через кожу. • Преодолевают все мембраны. • Отравления через ЖКТ или органы дыхания. • Всасываются уже во рту, желудке и кишечнике. • С кровью поступают во все органы и ткани. Наибольшее их количество в почках, печени, легких и кишечнике.

• В организме легко разрушаются, гидролизуются (сложные эфиры), отщепляют атом серы и галогены. • Могут образовываться более токсичные метаболиты. • В неизменном виде выводится около 50 %, выдыхается около 25 %, мочой 30 %. • Метаболизируются 50 % в печени и выводятся с мочой.

Изолирование • Экстракция из органов и тканей неполярными растворителями, можно диэтиловым эфиром или хлороформом. • Объект измельчают, подкисляют и экстрагируют неполярным растворителем. • Растворитель отгоняется, испаряется, с остатком проводят качественные реакции. • Остаток растворяют в воде или органическом растворителе. • Концентрации в объекте малые, поэтому используют хроматографические методы.

Методика: • 50 г биоматериала измельчают и 3 раза экстрагируют смесью ацетон-этанол-вода = 1, 5: 1. • Извлечения объединяются. Реэкстракция при р. Н=5 хлороформом. Извлечение упаривается. • Из мочи: мочу подкисляют до р. Н 5. Экстрагируют хлороформом или диэтиловым эфиром. Растворитель упаривают.

ТСХ • Остаток наносят на пластинку с силикагелем. • Растворитель гексан : ацетон (2: 1) или в чистом бензоле. • Проявляют в парах брома (проявляются ФОС и метаболиты). • Обрабатывают Fe. CI 3 и сульфосалициловой кислотой → синий фон с желтыми пятнами веществ, содержащими фосфат-ион.

Идентификация: Берут 3 пластинки хроматографические. Разгоняют. • Проявляют: - 1 -ую пластинку Pd. CI 2 или Ag. NO 3 с бромфеноловым синим - покажет S- содержащие пестициды (лиловый цвет после обработки лимонной к-той), - 2 -ю – спиртовым раствором Na. OH, пестициды, содержащие нитро-группу – ярко- желтые пятна, - 3 -ю – щелочным раствором резорцина – хлорофос и дихлорофос (роз. ). По размеру и интенсивности пятен – полуколичественное определение.

ГЖХ: • Гексановое извлечение вносят на колонку хроматографа. • Температура колонки 190 0 С. • Детектор термоионный (чувствительный к атому фосфора и галогенам). • Вводятся свидетели, сравниваются по времени удерживания. • Чувствительность выше, чем ТСХ.

Количественное определение 1) ГЖХ; 2) полуколичественные методы (для чистки образцов): берут смесь ацетилхолинэстеразы и холинэстеразы + по каплям бромтимоловый синий. Если холинэстераза не угнетена:

→

Там где ФОС, окраска изменяется позже. Чем больше содержание ФОС, тем медленнее изменяется окраска

Реакция с 2, 4 -динитрофенилгидразином • Из хлороформной вытяжки удаляют хлороформ, • добавляют 2 -3 мл воды очищенной, • раствор натрия гидроксида, • через 10 мин 0, 1 % раствор 2, 4 - динитрофенилгидразина в 4 М растворе хлороводородной кислоты, • 1 час нагревают на водяной бане при температуре 40 0 С. • По охлаждении к жидкости добавляют 0, 6 мл 4 М раствора натрия гидроксида и этанол. • В присутствии хлорофоса, дихлофоса и ацетальдегида появляется синее или сине- фиолетовое окрашивание.

• Метафос: 1 группа по токсичности. • По устойчивости 5 группа. • Метаболит – п-нитрофенол – токсичен. На него можно провести реакции: образования азокрасителя, индофенола, реакцию с железа (lll) хлоридом, реакцию образования основания Шиффа.

Pb(CH 3 COO)2 2) Кипячение со щелочью → Na 2 S -----------→ Pb. S + CH 3 COOH черный 3) ФЭК с п-аминофенолом

Карбофос: 1) c р-вом Драген-фа → темно- красные кристаллы в виде игл 2) + Hg. Cl 2 → желтые звездочки 3) + диазотир. сульфанил к-та → оранж. 4) р-в Марки → оранж, 5) с Cu 2+ + OH- + орг. р-ль → комплексы желто -бурого цвета, • к. о. ФЭК (5 реакция). • 3 гр. по токсичности, по устойчивости 6 гр. • ТСХ, ГЖХ, определение активности холинэстеразы

Все бедствия людей происходят не столько от того, Что они не сделали то, что нужно сделать, Сколько от того, что они делают то, чего не нужно делать. Л. Н. Толстой

Природные пиретроиды и их синтетические аналоги • В группу СП входит около 20 соединений, многие из которых применяются у нас в стране в сельском хозяйстве, производстве и быту. • СП применяют в виде: - концентратов эмульсий, - аэрозолей, - реже смачивающихся порошков, дустов.

• Перметрин – 3 -феноксибензил-3 -(2, 2 - дихлорвинил)-2, 2 -диметилциклопропан- карбоксилат (амбуш). Представляет собой феноксибензиловый эфир перметриновой кислоты. Применяется главным образом для борьбы с листогрызущими насекомыми, например, гусеницами.

• Циперметрин - α-циано-3 -феноксибензил -3 -(2, 2 -дихлоровинил)-2, 2 -диметил- циклопропанкарбоксилат (цимбуш). • Дельтаметрин – α-циано-3 - феноксибензил-3 -(2, 2 -дибромвинил)-2, 2 - диметил- циклопропанкарбоксилат

В 1994 г. в России освоено препаративное производство таких препаративных форм пиретроидов: • пирвол и креопир (содержащих перметрин), • зоошампуни «Тузик» (содержит 2 % циперметрина) и «Дружок» (содержит 2, 5 % циперметрина), • инсектицидные карандаши «Иней» (с циперметрином) и «Заполярный» (с дельтаметрином).

Физико-химические свойства СП • Перметрин и циперметрин – жидкости, дельтаметрин – кристаллическое вещество. • СП являются веществами нейтрального характера, хорошо растворимы в большинстве органических растворителей (ацетон, гексан, бензол, хлороформ, ацетонитрил) и плохо растворимы в воде.

• Устойчивы в кислых и нейтральных средах, • будучи сложными эфирами, гидролизуются под действием щелочей и сильных кислот с образованием на первом этапе продуктов деградации кислой и алкогольной части молекулы, которые далее могут подвергаться окислению, гидроксилированию и т. д. с образованием альдегидов, фенолов, кислот – в зависимости от структуры.

• Дельтаметрин и циперметрин , содержащие CN-группу, при перегонки с водяным паром в кислой среде гидролизуются с образованием синильной кислоты, которая может быть обнаружена в дистилляте. • При приготовлении растворов следует учитывать, что СП могут сорбироваться на стеклянной и полиэтиленовой посуде. Перметрин смывали со на стенок стеклянной посуды (16 %). • СП относятся к липофильным соединениям, распределяются преимущественно в липофильных тканях.

Токсикология СП, механизм их действия В ряду применяемых препаратов СП есть вещества: - высокотоксичные (LD 50 от 25 – 350 мг/кг, бета-циперметрин, дельтаметрин LD 50 128 мг/кг), - средней токсичности (LD 50 от 350 - 2500 мг/кг, перметрин, циперметрин), - малотоксичные (LD 50 от 2500 – 10000 мг/кг). Диапазон среднесмертельных доз весьма широк.

• Прием внутрь вызывает: - боль в эпигастрии, тошноту, рвоту, головную боль, головокружение, анорексию, усталость, стеснение в груди, тахикардию, нарушение сознания. - При тяжелых отравлениях возможны судорожные припадки с потерей сознания. - Данные о хронической токсичности отсутствуют. Смертельные дозы для СП не установлены.

Токсичность одного и того же соединения зависит от способа введения: при нанесении на кожу она уменьшается в сравнении с наблюдаемой при введении перрорально; при внутривенном введении она может увеличиваться в 10 раз и более (например, у циперметрина и дельтаметрина).

• Биологическая активность СП зависит от: - их строения, - поляризации молекул, - пространственной изомерии. Цис-формы, как правило, более токсичны, чем транс-формы. Более высокой токсичностью характеризуются соединения, содержащие в молекуле CN-группу, галогенизированные соединения (циперметрин, дельтаметрин).

• СП – яды нервного действия. • При острых отравлениях клиническая картина для теплокровных характеризуется симптомами поражения центральной и периферической нервной системы: - бронхоспазм, - диарея, - нарушение координации движений, - клонико-тонические судороги.

• СП влияют на активность холинэстеразы и окислительно-восстановительные системы. • СП способны вызывать угнетение: - холинэстеразы эритроцитов, - сыворотки крови, - печени, - мозга. • При этом влияние их на ХЭ мозга выражено в меньшей степени; это характерно и для ФОС. • Холинэстеразное действие СП уступает сильным ингибиторам ее из группы ФОС.

• Точкой приложения токсического действия СП являются натриевые каналы мембраны нейронов, нарушается структура мембраны клеток и функционирование их систем в результате изменения активности ХЭ в эритроцитах. • Действие СП на организм сложен: обусловлен взаимодействием со многими рецепторами.

• Кумулятивные свойства у СП выражены слабо. • Допустимая суточная доза поступления пестицида в организм человека, не оказывающая вредного действия, составляет для дельтаметрина и циперметрина 0, 003 мг/кг; для перметрина 0, 035 мг/кг. • При неправильном применении возможны острые, в том числе и со смертельным исходом, отравления.

Метаболизм СП • Метаболизм СП в организме человека не изучен. • Основной метаболизм (крысы) – разрыв эфирной связи в молекуле (гидролиз), - окисление и гидроксилирование кислой (по гемм-диметильной группе) и спиртовой (в 4’- положении фенильного остатка) частей её, - конверсия CN-группы (если она имеется) в тиоцианат и углекислый газ.

• Скорость гидролиза зависит от конфигурации молекулы СП. • Транс-изомеры гидролизуются быстрее, почти (в 50 раз), чем цис-изомеры, • однако, цис-изомеры легче окисляются, чем транс-изомеры.

• В результате метаболизма СП образуется до 18 и более метаболитов из одного соединения. • В основном – это продукты гидролиза, которые в различной степени конъюгируются с глюкуроновой кислотой, аминокислотами, сульфатами.

• Общий метаболит СП - 3 -феноксибензойная кислота, которая выделяется с мочой в свободном виде до 10 % от дозы, в виде глициновых конъюгатов –до 3 %. • Целью СХА, помимо нативных СП, могут и так называемые «наибольшие» метаболиты: - 3 -феноксибензойная кислота, - продукты её окисления, - гидроксилирования, - конъюгирования.

Пробоподготовка при анализе объектов биологического происхождения • Оптимальные условия изолирования СП из трупного материала и подготовки к анализу практически не разработаны. • Основной способ изолирования СП из объектов биологического происхождения – жидкостная экстракция органическими растворителями; метод твёрдофазной экстракции.

• Для изолирования индивидуальных СП или смесей используют гексан, петролейный эфир, ацетон, хлороформ, этанол, диэтиловый эфир, а также воду, подкисленную щавелевой кислотой с последующей экстракцией из кислого (р. Н 4) раствором хлороформом и эфиром.

• Простой способ первичной очистки экстрактов из объектов животного и растительного происхождения от ЭВ (липидов) является их отделение при охлаждении. • Полученный экстракт в течение часа охлаждают в холодильнике. Выпавший осадок отфильтровывают, из фильтрата после его разбавления водой (1: 2) СП экстрагируют гексаном 3 раза по 30 мл. • Используют жидкость-жидкостную экстракцию, различные хроматографические способы очистки.

Методы анализа СП в объектах окружающей среды и пищевых продуктах • Метод ГЖХ, детекторы: - более чувствительный – электронзахватный, позволяющий обнаружить на уровне нанограммовых и пикограммовых количеств; - ПИД, выявляющий на уровне нанограммовых количествах.

Используют капиллярные и стеклянные колонки. ГЖХ скрининг многокомпонентной смеси СП в экстрактах овощей и фруктов: - короткая стеклянная колонка (0, 5 м х 1, 75 мм), - температура колонки 230 0, детектора 2700; - газ-носитель – азот, - скорость 17, 5 мл/мин. Порядок выхода СП из колонки и времена удерживания относительно хлорсодержащего ФОС – хлорпирифоса имеет следующий вид: хлорпирифос 1 сек; перметрин 6, 03; циперметрин 8, 51; дельтаметрин 14, 59 сек.

• Метод ВЭЖХ (УФ-детектор), чувствительность на уровне микрограммовых количеств, используется при анализе перметрина, дельтаметрина и циперметрина в технических препаратах, в объектах растительного происхождения, почвах и т. п. • Применяют этот метод и к анализу метаболитов. • Использование ВЭЖХ с ИК-детектором позволило повысить селективность идентификации и определения геометрических изомеров и стереоизомеров СП.

Анализ синтетических пиретроидов методом ТСХ • При исследовании СП в основном используют восходящую одномерную хроматографию на пластинках силикагелей, реже на оксиде алюминия. • Наиболее результативны 2 -х и 3 -х компонентные системы растворителей на основе гексана и толуола с добавлением полярных растворителей – ацетона, этилацетата, диэтилового эфира и др.

Детектирование проводят водным или спиртовым раствором 5 -10 - 20 % раствором фосфорномолибденовой кислоты, обнаруживаются микрограммовые количества перметрина, циперметрина и дельтаметрина. • Можно использовать серебра нитрат, смешанный с 25 % раствором аммония гидроксида; • бромфеноловый синий, • лимонную кислоту.

• Возможность использований реакций окрашивания в анализе СП мало изучены. • Спектрофотометрия (УФ-область), которая использовалась ранее, из-за невысокой чувствительности не получила распространения.

Хлорорганические пестициды Иногда планку поднимают лишь для того, чтобы легче проскочить под нею.

Гексахлорциклогексан (ГХЦГ) • -

• Имеет 8 стабильных изомеров, различающихся положением (аксиальным а или экваториальным е) атомов хлора по отношению к плоскости цикла. • Технический гексахлорциклогексан содержит обычно 60 -70 % α-изомера, 7 -10 % β; 10 -15 % γ ; 6 -7 % δ и около 5 % других изомеров. • Получают в промышленности фотохимическим хлорированием бензола. • Только γ-изомер (линдан) является инсектицидом контактного, кишечного и фумигантного действия.

• Представляет собой бесц. кристаллы, без запаха. • Растворим в органических растворителях, не растворим в воде. • Линдан – темно-серое кристаллическое вещество с запахом плесени, который обусловлен примесями, чистое вещество – без запаха. LD 50 25 – 200 мг/кг.

Изолирование • Перегонка с водяным паром. • Дистиллят собирают в количестве 300 мл, который содержит твердые частицы белого цвета, на внутренней поверхности паровыводящей трубки и холодильника обычно откладываются частицы ГХЦГ, которые после перегонки промывают эфиром. • Эфирный слой смешивают с дистиллятом.

Качественное обнаружение • Часть упаренного эфирного раствора нагревают с водным или спиртовым раствором Na. OH в течение часа на кипящей водяной бане с обратным холодильником. • По окончании нагревания к жидкости прибавляют избыток HNO 3 в разведении 1: 1 до кислой реакции по лакмусу и 10 % р-р серебра нитрата. • Выделение белого творожистого осадка (или белой мути), растворимого в избытке раствора аммиака и вновь выделяющегося при добавлении изб. азотной кислоты, говорит о присутствии хлорид иона.

• -

• Для определения гексохлорана и продуктов его биотрансформации применяют ГЖХ, ГХ-МС, ВЭЖХ, ТСХ.

Применение и токсикологическое значение • Применяют: • для обработки с. -х. культур (кроме овощных и плодовых), лесонасаждений; • для борьбы с вредителями, обитающими в почвах; • для протравления семян, • дезинфекции зернохранилищ, • обработки древесины, • иногда для борьбы с паразитирующими на животных аргасовыми клещами. • Высокотоксичен. LD 50 25 -200 мг/кг, оказывает кожнорезорбтивное действие. • Сравнительно быстро выводится из организма.

• Легко всасывается в организм насекомого и вызывает быстрое поражение нервной системы. • Гексохлоран и другие хлорорганические соединения способны к кумуляции в организме, преимущественно в жировой клетчатке, печени и почках.

• Вызывают токсическое повреждение нервных клеток, венозное полнокровие головного мозга, микрокровоизлияния в лёгких, дистрофические изменения в мышце сердца, в печени и почках. • Особое нейротропное действие оказывает гексахлоран, приводящий к развитию полирадикулоневрита и токсических энцефалитов.

Гептахлор • Относится к производным индена. Белое кристаллическое вещество со слабым камфорным запахом. Т. пл. 95 -96 0 С.

• Практически не растворим в воде, растворим в этаноле, лучше в керосине и ароматических углеводородах, галогенпроизводных углеводородов. • Инсектицид, используется для борьбы с вредителями в почве: проволочником, личинками майского жука и др. • LD 50 140 – 220 мг/кг (крысы). • Высокотоксичен. Обладает выраженным кожнорезорбтивным действием, имеет кумулятивные свойства.

• При попадании в организм через пищевой канал в крови окисляется до эпоксигептахлора, который более токсичен, чем сам гептахлор. • Гептахлор и эпоксигептахлор накапливаются в тканях организма. В почве эти вещества сохраняются несколько лет. • Наличие остаточных количеств гептахлора в пищевых продуктах не допускается.

• Изолирование гептахлора из продуктов питания растительного происхождения основано на экстракции пестицидов из измельченного объекта исследования органическим растворителем с дальнейшей очисткой экстракта с помощью активированного угля марки АГ-2. • Качественное определение основано на образовании фиолетово-сиреневого пятна на фильтровальной бумаге, обработанной реактивом Давидова – Радомского (смесь диэтаноламина и 2 моль/л раствора КOH в метаноле в соотношении 1: 1). • Метод специфичный для гептахлора.

• Реакция с анилином и пиридином. В присутствии 0, 1 н раствора натрия гидроксида при наличии гептахлора через 1 -3 мин раствор приобретает темно-зеленую окраску.

СЕВИН (1 -нафтил-N-метилкарбаминат) • Производное карбаминовой кислоты, корневой гербецид. • Белое кристал. в-во, т. пл. 142 0 С. • Плохо растворим в воде, лучше растворяется в органических растворителях. • При комнатной температуре устойчив по отношению к воде, свету, кислороду воздуха. • В щелочной среде быстро подвергается гидролизу.

• Изолирование севина и основного продукта его омыления α-нафтола при ХТА внутренних органов трупа производится повторной экстракцией бензолом. • Бензол удаляется, остаток растворяется в 10 - 15 мл этанола. Микрокристаллические реакции: - Реакция перекристаллизации. Из спиртового или хлороформного раствора севин кристаллизуется в виде характерных кристаллов и сростков (кресты и дендриты).

- С 1 % раствором пикриновой кислоты образует темно-желтые сростки кристаллов в виде снопов и пучков; - С 2 % раствором хлорной ртути севин образует бесцветные кристаллы в виде вытянутых шестиугольников и призм. Реакции окрашивания Реакции основаны на предварительном гидролизе севина до α-нафтола и последующем его обнаружении.

• С купробромидом натрия при нагревании до Т 60 0 С красно-фиолетовое или сине- фиолетовое окрашивание. • С 4 -аминоантипирином – оранжево-красное окрашивание, переходящее в хлороформ при встряхивании. • С 0, 5 % раствором Na. NO 2 в разбавленной серной кислоте желтое окрашивание, переходящее в оранжевое при добавлении щелочи. • С 1 % свежеприготовленным раствором Fe. Cl 3 – розовое окрашивание.

Оксид углерода (ll) • СО – бесцветный газ без запаха и вкуса. • Гемоглобинотропный яд, превращающий гемоглобин в неактивную форму. • Карбокисгемоглобин образуется в результате взаимодействия гемоглобина с оксидом углерода во вдыхаемом воздухе, образующимся вследствие неполного сгорания углеродсодержащих веществ.

• Причиной смерти является острая гемическая гипоксия. Средняя физиологическая норма содержания карбоксигемоглобина в крови до 5 %, но у некоторых людей (например, курильщиков) концентрация карбоксигемоглобина в крови может увеличиваться до 10 -16 %. • Оксид углерода обладает высоким сродством к железу гемоглобина.

• Константа равновесия образования комплекса Hb·CO в 300 раз выше, чем Hb·O 2. • Вследствие конкурирующего комплексообразования угарный газ замещает кислород гемоглобина, образуя карбоксигемоглобин. • Тяжесть отравления определяется степенью насыщения крови карбоксигемоглобином. • Смерть возможна при связывании 60 % гемоглобина крови и более. • При легочных и сердечно-сосудистых заболеваниях, алкогольной интоксикации смерть может наступить при меньшем содержании карбоксигемоглобина.

• При смертельном отравлении оксидом углерода (ll) кровь, ткани и трупные пятна ярко-розовые. • Морфологические изменения при отравлениях оксидом углерода (ll) – неспецифическая дистрофия. • На интоксикацию указывает присутствие в крови трупа карбоксигемоглобина, а в мышцах – карбоксимиоглобина.

• Карбокисгемоглобин придает кожным покровам и видимым слизистым оболочкам трупа ярко-розовый или малиновый цвет. • Трупные пятна разлитые, обильные, с четкими границами, также ярко-розовые. • При диагностики острого отравления угарным газом следует незамедлительно определить содержание карбоксигемоглобина (Hb·CO) в крови, либо оксида углерода СО в выдыхаемом воздухе (ВОЗ, 1998).

Источники СО • Встречается везде, где существуют условия для неполного сгорания вещества, содержащего углерод; • входит в состав многих промышленных газов (доменный, генераторный, коксовый); • широко применяется в современном органическом синтезе; • Важными источниками СО являются выхлопные газы автомобилий, дым от пожаров, неверно эксплуатируемые нагревательные системы.

• Единственным путем поступления в организм СО являются дыхательные пути. • Для анализа используют цельную кровь, обработанную гепарином или другим стабилизатором, предохраняющим её от свертывания. • К разбавленным пробам исследуемой и нормальной крови прибавляют реагент.

1 % раствор танина Нормальная кровь (Нb-O 2) - серая окраска Кровь, содержащая карбоксигемоглобин (Нb-СO) – сохраняется розовая окраска. 20 % раствор калия ферроцианида (III), разв. уксусная кислота (Нb-O 2) - буреет (Нb-СO) - сохраняется розовая окраска. Формалин (Нb-O 2) - грязно-бурая окраска (Нb-СO) - сохраняется розовая окраска.

Свинца ацетат (Нb-O 2) - грязно-зеленая окраска (Нb-СO) - сохраняется розовая окраска. 30 % раствор Na. OH (Нb-O 2) - зелено-черная окраска (Нb-СO) - сохраняется розовая окраска. Λmax (Нb-O 2) - 577 -589 и 536 -556 (Нb-СO) – 564 -579 и 536 -523.

Химико-токсикологический анализ веществ, изолируемых экстракцией водой в сочетании с диализом • Группа веществ, изолируемых методом диализа, включает минеральные кислоты (серную, хлороводороднуюю, азотную), щелочи (гидроксиды калия и натрия, водный раствор аммиака), соли (нитриты натрия и калия, нитраты натрия и аммония, хлорат калия).

• В биологическом материале вещества неустойчивы: едкие щелочи превращаются в углекислые, • кислоты – в соли, например, серная кислота превращается в гидросульфат натрия. • В этом случае обнаружение исходных токсических веществ невозможно, так как продукты превращений являются естественными составными частями организма.

Объектами исследования в этом случае являются: • содержимое желудка, • рвотные массы, • остатки пищи, • части одежды и пр. При исследовании на соли к объектам исследования следует отнести и печень.

• Все эти вещества обладают свойствами сильных электролитов, т. е. диссоциируют полностью на катионы и анионы. • Для изолирования их из биологического материала применяют диализ.

ИССЛЕДОВАНИЕ ДИАЛИЗАТА Минеральные кислоты • На возможность присутствия минеральных кислот указывают результаты предварительного исследования (р. Н биологического объекта, реакции на катионы и анионы). • Для доказательства отравлений минеральными кислотами необходимо отогнать их из диализата.

• При этом отгоняются свободные кислоты, а не анионы кислот, которые являются нормальной составной частью организма. • Ввиду того, что многие кислоты перегоняются при очень высокой температуре, их предварительно переводят посредством химических превращений в более летучие соединения. • Так, серную кислоту восстанавливают до сернистой кислоты, а азотную кислоту восстанавливают до окислов азота.

Обнаружение и количественное определение серной кислоты • Переводят в летучее соединение путем восстановления ее медными опилками. • Собирают аппарат для перегонки, состоящей из колбы для восстановления, герметично соединенной с холодильником, снабженным аллонжем, конец аллонжа опускают в приёмник.

• В приёмник помещают раствор йода в иодиде калия. • Колбу нагревают на песчаной бане, при этом идет процесс восстановления серной кислоты до сернистого ангидрида: H 2 SO 4 + Cu → Cu. O + H 2 SO 3 → SO 2↑ + H 2 O • Раствор иода в приемнике окисляет продукт восстановления до серной кислоты: SO 2 + H 2 O → H 2 SO 3 + I 2 + H 2 O → H 2 SO 4 + 2 HI

• При добавлении к части дистиллята бария хлорида выпадение белого осадка указывает на обнаружение кислоты серной: H 2 SO 4 + Ba. Cl 2 → Ba. SO 4 ↓ + 2 HCl • Количественное определение кислоты серной проводят путем титрования части отгона раствором натрия гидроксида. • Количество сульфатов можно определить также гравиметрическим методом по осадку бария сульфата.

Обнаружение и количественное определение азотной кислоты На присутствие азотной кислоты в биологическом объекте могут указывать результаты предварительных испытаний. - Желтая окраска тканей биологического объекта (ксантопротеиновая реакция), которая является результатом нитрования аминокислоты фенилаланина.

- Реакция с дефиниламином (синее окрашивание образуется в присутствии кислоты азотной, нитрита или нитрата натрия, нитрата аммония и др. ). • Перегонку азотной кислoты проводят путем нагревания диализата с медными опилками: • 3 Cu + 2 HNO 3 → 3 Cu. O + 2 NO↑ + H 2 O • При перегонке происходит окисление оксида азота (II) до оксида азота (IV), при этом образуются бурые пары: • 2 NO + O 2 → 2 NO 2↑

• В приемнике при взаимодействии с водой образуется смесь азотной и азотистой кислот: 2 NO 2 + H 2 O → HNO 3 + HNO 2 • Кислоты в отгоне исследуют следующими химическими реакциями: - Реакция окрашивания шерстяных ниток в желтый цвет. - Реакция с дифениламином. Реакция образования азокрасителя с реактивом Грисса, который представляет собой растворы сульфаниловой кислоты и ά-нафтиламина.

• Количественное определение проводят методом фотоэлектроколориметрии по продукту реакции с реактивом Грисса.

Обнаружение солей азотистой кислоты • Довольно часто встречаются отравления солями азотистой кислоты – нитритами. • Для перевода нитритов в летучее состояние, перед перегонкой, к диализату прибавляют слабую уксусную кислоту. • Нитриты перегоняются в виде ангидрида азотистой кислоты: 2 Na. NO 2 + 2 CH 3 COOH → N 2 O 3↑ + 2 CH 3 COONa + H 2 O

• Использование сильных минеральных кислот недопустимо, так как в этом случае при разложении нитратов (могут присутствовать в диализате), образуется азотная кислота, которая также может восстанавливаться в азотистую кислоту.