Государственное бюджетное профессиональное образовательное учреждение Департамента здравоохранения

Описание презентации Государственное бюджетное профессиональное образовательное учреждение Департамента здравоохранения по слайдам

  Государственное бюджетное профессиональное образовательное учреждение  Департамента здравоохранения города Москвы « Государственное бюджетное профессиональное образовательное учреждение Департамента здравоохранения города Москвы « № 1» Медицинский колледж № 4 филиал . 03 « Внеаудиторная самостоятельная работа по ПМ проведение » лабораторных биохимических исследований Методы определения креатина и креатинина в биологических жидкостях : 31 -4 (2) . . Студентка группы Л Лосева А Г : . . Преподаватель Морозова Л Г 2016 Москва

Понятия креатина и кретинина - Креатин и креатинин  - компоненты остаточного азота, вПонятия креатина и кретинина — Креатин и креатинин — компоненты остаточного азота, в синтезе которых принимают участие аминокислоты аргинин, глицин и метионин — Существует эндогенный (образуется в тканях) и экзогенный (в пищевых продуктах) креатинин — В почечной ткани при участии фермента трансамидиназы образуется предшественник креатина – гуанидин-уксусная кислота (гуанидинацетат), которая подвергается метилированию в печени. — С током крови креатин доставляется из печени в мышечную ткань, где происходит его фосфорилирование под влиянием фермента креатинкиназы, образуется креатинфосфат. — Макроэнерг креатинфосфат, образованный в митохондриях миоцитов, перемещается к миофибриллами, где происходит его разрушение с выделением энергии, а также остатка неорганического фосфора и молекулы воды. — Образовавшийся креатинин является беспороговым веществом , который выделяется с мочой.

Креатинин • Креатинин является продуктом белкового обмена, он образу ется при взаимодействии аминокислот глицина,Креатинин • Креатинин является продуктом белкового обмена, он образу ется при взаимодействии аминокислот глицина, аргинина, метионина. Креатинин присутствует в крови в свободном виде и в виде креатинфосфата в мышцах и миокарде. • Креатинин является постоянной составной частью мочи. Суточное выделение креатинина с мочой постоянно и пропорционально общей мышечной массе тела.

Методы определения креатина в биологических жидкостях.  • Креатин определяют после предварительного перевода вМетоды определения креатина в биологических жидкостях. • Креатин определяют после предварительного перевода в креатинин при нагревании исследуемого образца с минеральной кислотой • Ангидридом креатина является креатинин, который образуется в мышцах из креатинфосфата и вместе с креатином содержится во фракции оста точного азота крови.

Синтез креатина  1 ЭТАП – В ПОЧКАХ  АРГИНИН + ГЛИЦИН  Синтез креатина 1 ЭТАП – В ПОЧКАХ АРГИНИН + ГЛИЦИН ОРНИТИН + ГУАНИДИНАЦЕТАТ 2 ЭТАП – В ПЕЧЕНИ ГУАНИДИНАЦИТАТ + Аденозил. МЕТИОНИН КРЕАТИНФОСФАТ + ГОМОЦИСТЕИН В МЫШЦАХ КРЕАТИНФОСФАТ + АДФ КРЕАТИНКИНАЗА КРЕАТИН + АТФ Спонтанный, т. е. самопроизвольный, гидролиз креатина ведет к образованию креатинина, который практически полностью выделяется с мочой. Креатинин является конечным продуктом распада креатина, который вовлечен в энергетический обмен мышечной и других тканей.

Методы определения креатинина  Колориметрические :  • Метод Поппера, основанный на реакции Яффе.Методы определения креатинина Колориметрические : • Метод Поппера, основанный на реакции Яффе. • основанные на реакции креатинина с 3, 5 динитробензойной ‑ кислотой • с ортонитробензальдегидом • с α нафтолом ‑ Ферментативные: • с ферментом креатинкиназой • c использованием ферментов пируваткиназы, лактатдегидрогеназы

Колориметрические :  • основанные на реакции креатинина с 3, 5 динитробензойной ‑ кислотойКолориметрические : • основанные на реакции креатинина с 3, 5 динитробензойной ‑ кислотой — окраска мало стабильна и метод применяется редко. • с ортонитробензальдегидом, базируется на превращении креатинина в метил гуанидин. Метод весьма специфичен, но ‑ трудоемок и длителен в исполнении. • с α нафтолом — в основе лежит реакция Сакагучи на аргинин: ‑ гуанидиновая группировка аргинина окисляется гипобромитом и аминокислота конденсируется с α нафтолом. ‑

Ферментативные:  • с ферментом креатинкиназой — точен, но требует специальной аппаратуры.  •Ферментативные: • с ферментом креатинкиназой — точен, но требует специальной аппаратуры. • c использованием ферментов пируваткиназы, лактатдегидрогеназы — эти методы неспецифичны и дорогостоящи.

Реакция Яффе - Определение концентрации креатиниа в сыворотке(плазме) крови и моче Принцип метода: Реакция Яффе — Определение концентрации креатиниа в сыворотке(плазме) крови и моче Принцип метода: Креатинин в щелочной среде образует с пикриновой кислотой окрашенный комплекс. Исследуемый материал: Негемолизированная сыворотка или плазма крови, моча Анализ: 1. — 0, 5 мл сыворотки или плазмы крови + 1, 0 мл воды + 0, 5 мл реагента № 4. — перемешать и через 10 минут центрифугировать при 900 g 15 мин. — Для дальнейшего анализа использовать прозрачный супернатант. — Для приготовления холостой пробы: 1, 5 мл воды + 0, 5 мл реагента № 4 (контрольный раствор). 2. Свежая моча разводится дистиллированной водой в соотношении 1: 99.

Реакция Яффе. Реактивы (объемы в мл) Проба 1 (сыворотка/плазма) Проба 2 (моча) Стандарт БланкРеакция Яффе. Реактивы (объемы в мл) Проба 1 (сыворотка/плазма) Проба 2 (моча) Стандарт Бланк Сыворотка/плазма крови Моча (1: 99) Дистиллир. вода Реактив № 4 0, 50 —- 1, 00 0, 50 —- 0, 50 0, 25 —- —- 0, 75 0, 25 Содержимое пробирок перемешивают, через 10 -12 минут пробу N 1 центрифугируют при 900 g в течение 12 -15 минут. Для дальнейшего анализа используют прозрачную надосадочную жидкость (супернатант). Содержимое пробирок перемешивают, выдерживают при комнатной температуре 20 -25 С 20 минут. Точно через 20 минут пробы фотометрируют против контроля на реактивы при длине волны 505 нм (ФЭК-490 нм) в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 мм (1 см). Надосадочная жидкость (супернатант) Контрольный раствор Реактив № 3 Реактив № 2 Реактив № 1 1, 00 —- 0, 50 1, 00 —— 0, 50 —— 1, 00 0, 50 —— 1, 00 —— 0,

Реакция Яффе Расчет: сыворотка  крови: Соп =  (Епр1/Ест) х 177 [мкмоль/л], Реакция Яффе Расчет: сыворотка крови: Соп = (Епр1/Ест) х 177 [мкмоль/л], где: Епр1 — экстинкция пробы 1, Ест — экстинкция стандарта, 177 — концентрация креатинина в стандарте. моча: Соп = (Епр2/Ест) х 8, 85 [ммоль/л] суточная моча: Соп = (Епр2/Ест) х 8, 85 х К [ммоль/сутки], Епр2 — экстинкция пробы 2, Ест — экстинкция стандарта, 8, 85 — концентрация креатинина в стандарте с учетом разведения где К – количество суточной мочи (л) Референтные значения (нормальные величины): сыворотка — женщины — 53 -97 мкмоль/л; мужчины — 61 -115 мкмоль/л; суточная моча — 8, 8 -13, 3 ммоль/сутки.

Проба Реберга, или клиренс эндогенного креатинина, — весьма важный показатель.  -демонстрирует, какой объемПроба Реберга, или клиренс эндогенного креатинина, — весьма важный показатель. -демонстрирует, какой объем плазмы крови очищается от данного вещества за одну минуту при прохождении через почки. — отклонения от нормы (в любую стороны) демонстрируют те или иные нарушения в работе почек, в частности, клубочковой системы — разработана в 1926 году датским физиологом Паулем Ребергом

Проба Реберга - позволяет судить о клубочковой фильтрации и канальцевой реабсорбции.  - ПробаПроба Реберга — позволяет судить о клубочковой фильтрации и канальцевой реабсорбции. — Проба основана на том, что креатинин фильтруется только клубочками, практически не всасывается и не секретируется Проведение пробы. — Обследуемый натощак выпивает 400 – 500 мл воды или слабого чая и мочится (эту порцию выливают). Время мочеиспускания точно отмечают. Ровно через 1 час собирают мочу (полностью). — В середине этого производят забор венозной крови. По объему собранной мочи устанавливают минутный диурез.

Проба Реберга - В крови (сыворотке) и моче определяют концентрацию креатинина и высчитывают индексПроба Реберга — В крови (сыворотке) и моче определяют концентрацию креатинина и высчитывают индекс концентрации креатинина (С) путем деления показателя концентрации креатинина в моче на показатель креатинина в крови. Зная диурез в минуту, высчитывают клубочковую фильтрацию (Ф) по формуле: , где С – индекс концентрации креатинина, Д – минутный диурез. — В норме клубочковая фильтрация колеблется от 80 до 140 мл/мин. — Повышение клубочковой фильтрации наблюдается при повышенном сердечном выбросе, гипертонической болезни, беременности, ожогах, белковой диете, анемии. — — Снижение клубочковой фильтрации наблюдается при остром и хроническом гломерулонефритах, нефросклерозе, миеломной болезни. При этих заболеваниях снижению клубочковой фильтрации предшествует нарушение контрационной способности почек.

Канальцевая реабсорбция (Р)  определяется разницей между клубочковой фильтрацией и минутным диурезом и выражаетсяКанальцевая реабсорбция (Р) определяется разницей между клубочковой фильтрацией и минутным диурезом и выражается в процентах. Эта величина рассчитывается по формуле: , где Ф – клубочковая фильтрация, Д – минутный диурез В норме канальцевая реабсорбция составляет 98 -99, 9%. Снижение канальцевой реабсорбции наблюдается при острых и хронических пиелонефритах, хроническом гломерулонефрите, нефросклерозах и других диффузных поражениях почек, а также может наблюдаться при нефритах, нефротическом синдроме. Проба Реберга

Нормы креатинина • Содержание креатинина сыворотки крови:  • - мужчины — 61— 115Нормы креатинина • Содержание креатинина сыворотки крови: • — мужчины — 61— 115 мкмоль/литр или 0, 061 — 0, 115 ммоль/литр; • — женщины — 53— 97 мкмоль/литр или 0, 053 — 0, 097 ммоль/литр. • Мочу перед анализом разводят дистиллированной водой в соот ношении 1: 100 (результат умножают на 50).

Клинико-диагностическое значение определения креатинина (кровь) Креатининемия (гиперкреатининемия) – это повышение уровня креатинина в крови.Клинико-диагностическое значение определения креатинина (кровь) Креатининемия (гиперкреатининемия) – это повышение уровня креатинина в крови. Продукционная креатининемия (гиперкреатининемия) – отмечается при Кишечной непроходимости, острой жёлтой атрофии печени, хлоропривной азотемии , декомпенсации сердечно-сосудистой системы, пневмонии, лихорадочных состояния, мышечной дистрофии. Возрастание содержания креатинина в сыворотке (плазме) крови может быть вызвано изменением эндокринного баланса: при сахарном диабете, гипертиреозе, гипофункции надпочечников, акромегалии и гигантизме. Ретенционная креатининемия (гиперкреатининемия) – обусловлена нарушением (острым и хроническим) функции почек любого происхождения и обычно наблюдается при уменьшении клубочковой фильтрации, поражении воспалительным процессом паренхимы почек, обтурации мочевых путей ниже уровня почек. Креатининемия является как ранним показателем развивающейся недостаточности почек. Устойчивое повышение уровня креатинина в крови, как и возрастание концентрации в ней, указывает на нарушение функции почечного фильтра.

Клинико-диагностическое значение определения креатинина (моча) В моче  помимо эндогенного креатинина содержится экзогенный, поступающийКлинико-диагностическое значение определения креатинина (моча) В моче помимо эндогенного креатинина содержится экзогенный, поступающий в организм с мясной пищей. Поэтому уровень экскреции креатинина с мочой несколько зависит от характера питания. Увеличение выведения креатинина с мочой отмечается при большой физической нагрузке (мышечной работе), лихорадочных состояниях, острых инфекционных заболеваниях (при которых происходит усиления цитолиза, т. е. повышение распада белков клеток), пневмонии, выраженной недостаточности функции печени. Увеличение секреции креатинина с мочой происходит при ряде эндокринных расстройств (акромегалии, гигантизме, сахарном диабете). Уменьшение выведения креатинина с мочой наблюдается при голодании, длительном обездвижении больных (мышечная дистрофия), параличах, анемии, лейкозах, гипертиреозе, хронических заболеваниях почек, амилоидозе почек, голодании. Параллельное определение концентрации креатинина в крови и моче значительно расширяет диагностические возможности оценки функционального состояния почек, поскольку позволяет получить информацию об интенсивности основных функций нефрона: фильтрации, реабсорбции, секреции, а также почечного кровообращения.

Спасибо за внимание! Спасибо за внимание!