Физиология бактерий Питательные среды методика выделения чистых культур

Физиология бактерий. Питательные среды. методика выделения чистых культур аэробов (факультативных анаэробов)

БАКТЕРИАЛЬНЫЕ ФЕРМЕНТЫ Оксидоредуктазы Трансферазы Гидролазы Лиазы Изомеразы Лигазы ( синтетазы )

КЛАССИФИКАЦИЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ПО СОСТАВУ (МПБ, МПА) ПО КОНСИСТЕНЦИИ (плотные, жидкие, полужидкие) ПО НАЗНАЧЕНИЮ -ОСНОВНЫЕ (МПА, МПБ) -СПЕЦИАЛЬНЫЕ (кровяной, сывороточный агар) -ЭЛЕКТИВНЫЕ (среда Плоскирева, желточно-солевой агар) -ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНО-ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ Гисса, Эндо) (среда

Состав питательных сред: Питательный бульон: Панкреатический гидролизат рыбной муки Натрий хлористый Питательный агар: Панкреатический гидролизат рыбной муки Натрий хлористый Агар микробиологический

Кровяной агар: Питательный агар + дефибринированная кровь Сывороточный агар: Питательный агар + 15 -20 % сыворотка крупного рогатого скота (лошадиная или бычья) Среда Плоскирева: Питательный агар + натриевые соли желчных кислот, лактоза, бриллиантовый зеленый, нейтральный красный, иод, сода кальцинированная.

Среда Эндо: Питательный агар+ фуксин основной, лактоза Среда Гисса: Питательный агар + один углевод + индикатор (глюкоза, маннит, мальтоза, сахароза, лактоза) Среда Китта-Тароцци: Питательный бульон + 0, 5 % глюкоза + кусочки свежих органов животных, вазелиновое масло Среда Вильсона-Блера: Питательный агар + 1% глюкоза + 20% раствор сульфита натрия + 8 % раствора хлорида железа

ФИЗИОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ Дата день материалы Что сделать Изучить Выращенные методы посевы анаэробов: культивир а) на среде Китта- ования макроскоп Тароцци; ически, зарисовать. б) в высоком столбике сахарного агара; результат рисунок

Методика выделения чистых культур аэробных(факультативных анаэробов) бактерий (1 день). Дата день материал Что сделать 1 день Взвесь бактерий в физиологи ческом растворе. Приготовить мазок рисунок препарат, окрасить по Граму, провести бактериоскопию, описать морфологию бактерий зарисовать. результат

Дата день материал Что сделать Посеять на чашку с питательным агаром методом последовательной штриховки с целью механического разобщения для получения изолированных колоний результат

ПЛАН ОПИСАНИЯ КОЛОНИЙ 1) Форма колонии 2) Размер (диаметр) колонии 3) Поверхность 4) Профиль 5) Прозрачность 6) Цвет (пигмент) 7) Край 8) Структура 9) Консистенция

Методика выделения чистых культур аэробных бактерий (продолжение - 2 день) 2 день материал Рост колоний на чашке с МПА Что сделать 1) Изучить характер роста (описать морфологию колонии) 2) Приготовить мазкипрепараты, окрасить по Результа Колония № 1 Колония № 2

материал Что сделать 3)Произвести пересев материала из колонии № 1 и № 2 в пробирки со скошенным питательным агаром для накопления чистой культуры результат Описание Колоний Рисунок

ПЛАН ОПИСАНИЯ ХАРАКТЕРА РОСТА НА СКОШЕННОМ АГАРЕ 1) Однородность 2) Поверхность 3) Прозрачность 4) Цвет (пигмент) 5) Консистенция

Методика выделения чистых культур аэробных бактерий (продолжение – 3 день) 3 день материал Что сделать результат Рост • Изучить характер рисунок культур на роста скошенно макроскопически м агаре • Приготовить мазки-препараты, окрасить по Граму, оценить чистоту культуры,

день материал Что сделать результат 3) Произвести посев Описание чистой культуры на роста короткий «пестрый ряд» : Рисунок среда Гисса с глюкозой, питательный бульон с индикаторами на индол (щавелевая кислота) и сероводород (уксусно-кислый свинец)

Изучение биохимических свойств

Методика выделения чистых культур аэробных бактерий (окончание - 4 день) материал 4 день Что сделать Посевы 1)Изучить характер выделенных роста на МПБ культур на 2)Оценить среде Гисса с биохимические глюкозой и свойства: питательном ферментацию бульоне с глюкозы, индикаторам образование и на индол и индола, сероводорода результат

материал Что сделать Пользуясь учебной таблицейопределителем сделать заключение о видах выделенных культур результат

ТАБЛИЦА – ОПРЕДЕЛИТЕЛЬ ВИДА БАКТЕРИЙ ВИД МОРФОЛОГИЯ БАКТЕРИЙ E. coli Палочки средних Колонии бесцветные, размеров, полупрозрачн располага ые, гладкие, ются одиночно блестящие, 25 мм, с Грам волнистым краем. S. epidermidi Мелкие s кокки располага ются грозьдями Грам + МОРФОЛОГИЯ КОЛОНИЙ Колонии белые, гладкие, блестящие, выпуклые, 1 -2 мм, с ровным краем РОСТ НА ЖИДКОЙ СРЕДЕ ОБРАЗО ВАНИЕ ИНДОЛА Образ вание серово орода К + - К - + ФЕРМЕ Н ТАЦИЯ ГЛЮКО ЗЫ Равно мер ное помут нение Г Равно мер ное помут нение

ВИД МОРФОЛОГИЯ БАКТЕРИЙ МОРФОЛОГИ Я КОЛОНИЙ РОСТ НА ЖИДКОЙ СРЕДЕ S. pyoge nes Сферические или овальные, располагаются парами или цепочками Колонии очень мелкие, бесцвет ные прозрач ные, гладкие, блестящие Придон ный Колонии красные, розовые, 2 -3 мм Равно мерное помут грам + Serratia marces cens Палочки средних размеров, располагаются одиночно Грам - ФЕРМЕН ТАЦИЯ ГЛЮКОЗЫ ОБРАЗО ВАНИЕ ИНДО ЛА ОБРАЗВА НИЕ СЕРОВО ДОРОДА К - - КГ + - рост нение

ВИД Sarcina ventriculi МОРФОЛОГИЯ БАКТЕРИЙ МОРФОЛОГИЯ КОЛОНИЙ кокки средних Колонии гладкие, размеров, блестящие, ж располага елтые, 1 -3 ются пакетами мм, край ровный 8 -16 и более клеток РОСТ НА ЖИДКОЙ СРЕДЕ ФЕРМЕНТ А ЦИЯ ГЛЮКОЗЫ ОБРАЗОВА НИЕ ИНДОЛА Помут нение осадок КГ - + - К - - Грам + S. dysen teriae Палочки средних размеров располагают ся одиночно Грам - Колонии бесцветные, полупрозрач ные, гладкие, блестящие, 2 -5 мм, с волнистым краем. ОБРАЗОВА НИЕ СЕРОВОД ОРОДА Равно мер ное помутне ние

УИРС: исследование микрофлоры организма человека материал Мазок-препарат из S. salivarius, окраска по Граму культуры Мазок – препарат из культуры L. saivarius окраска по Что сделать результат Пропикроскопиро рисунок вать, изучить морфологию бактерий, зарисовать

материал Что сделать результат Мазокпрепарат из культуры Candida albicans, окраска метиленовым синим Пропикроскопир рисунок о вать, изучить морфологию бактерий, зарисовать

1 день материал Содержимое кариозной полости или зубодесневой бороздки Кожа пальца Что сделать Приготовить мазок – препарат, окрасить по Граму. Изучить микробный состав. Зарисовать. Произвести посев на сахарный агар методом отпечатков Отделяемое слизистой Произвести посев на сахарный агар методом последовательной результат

Материал Что сделать 2 Рост 1)Изучить характер роста. де колоний на 2)Приготовить мазкинь чашке с сахарным препараты из агаром колоний, окрасить по Граму, изучить морфологию, зарисовать 3)Сделать заключение о состоянии микрофлоры иследуемых результат Описание колоний Рисунки

РЕЗИДЕНТНАЯ МИКРОФЛОРА ПОЛОСТИ РТА АЭРОБЫ И ФАКУЛЬТАТИВНЫЕ АНАЭРОБЫ В ротовой жидкости Частота обнаружения, % Концентрация в 1 мл Частота обнаружения в десневых карманах, % S. mutans 100 1, 5 х 105 100 S. salivarius 100 107 100 S. sanguis 100 106 - 108 100 2. Neisseria 100 105 - 107 до 50 3. Lactobacillus 90 103 - 104 до 20 4. Staphylococcus 80 103 - 104 до 50 5. Сorynaebacterium, дифтероиды 80 - до 20 Род, вид 1. Streptococcus 2 3

РЕЗИДЕНТНАЯ МИКРОФЛОРА ПОЛОСТИ РТА АНАЭРОБЫ В ротовой жидкости Частота обнаруже ния, % Концентрация в 1 мл Частота обнаружения в десневых карманах, % 1. Veilonella 100 106 - 108 100 2. Peptostreptococcus 100 - 100 3. Bacteroides 100 - 100 4. Fusobacterium 75 102 - 104 100 5. Actinomyces 100 1, 2 -3, 5 х 106 до 50 6. Treponema 50 - до 50 Род, вид

Микрофлора ротовой полости (для стоматологического факультета) день материал Что сделать результат 1 Зубная Приготовить рисунок день бляшка мазок-препарат, окрасить по Граму, изучить микробный состав, зарисовать 1 Смыв из день полости рта (зубная Произвести посев шпателем 0, 1 мл на ЖСА, кровяной агар, среду Сабуро

материал 2 Рост день колоний на ЖСА, кровяном агаре, среде Сабуро Что сделать Описать морфологию колоний с каждой среды макро- и микроскопически результат

материал Что сделать результат Приготовить мазкирисунок препараты из каждого вида колоний, окрасить по Граму, изучить и описать морфологию микробов, зарисовать Дать заключение о состоянии микрофлоры ротовой полости