Диагностика туберкулеза Основным методом прижизненной диагностики туберкулеза является

Диагностика туберкулеза Основным методом прижизненной диагностики туберкулеза является аллергический. Позволяет выявлять больных с любыми формами туберкулеза, независимо от того, имеет ли животное клинические признаки болезни или нет. Для диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота, буйволов, свиней, коз, овец, лошадей, верблюдов, собак, обезьян и пушных зверей применяют туберкулин- стерильный фильтрат убитых культур возбудителя туберкулеза двух видов: сухой очищенный (ППД) туберкулин для млекопитающих и ППД- туберкулин для птиц. Туберкулин ППД для птиц готовят из возбудителя туберкулеза птичьего вида и применяют для диагностики туберкулеза птиц и свиней

Диагностика • Туберкулин (ППД-purified protein derivative)-предназначен для аллергической диагностики туберкулеза у млекопитающих.

ДИАГНОСТИКА

ДИАГНОСТИКА • Основным прижизненным методом диагностики туберкулеза у животных- аллергическая внутрикожная туберкулиновая проба. У лошадей, верблюдов, буйволов диагностику проводят глазным методом (офтальмопроба). При необходимости офтальмопробу проводят у крупного рогатого скота одновременно с внутрикожной пробой.

ДИАГНОСТИКА • Туберкулинизации подвергают: • крупный рогатый скот (буйволов) два раза в год: весной, перед выгоном на пастбище, и осенью, перед постановкой скота на зимнее содержание, а молодняк крупного рогатого скота с 2 месячного возраста, скот откормочных групп — один раз в год; • лошадей, мулов, ослов, овец и коз — в зависимости от эпизоотической обстановки; • всех взрослых свиноматок, а также молодняк после отъема во всех племенных хозяйствах — один раз в год, а на остальных свинофермах- в зависимости от эпизоотической обстановки; • взрослую птицу (старше двух лет) исходных линий и прародительских стад на племенных заводах и селекционноплеменных птицеводческих станциях- один раз в год.

ДИАГНОСТИКА • Животных, принадлежащих гражданам, проживающим на территории хозяйств или в отдельных населенных пунктах, исследуют на туберкулез одновременно с проведением туберкулинизации в хозяйстве.

ДИАГНОСТИКА • При внутрикожном методе туберкулинизации туберкулин вводят крупному рогатому скота, буйволам, зебу видному скоту, оленям (маралам) в середину шеи, быкам-производителям — в под хвостовую складку, верблюдам -в область наружной поверхности уха в 2 см от его основания, козам -в толщу нижнего века; собакам, обезьянам и пушным зверям (кроме норок) — в область внутренней поверхности бедра или локтевой складки; норкам — интрапальпебрально в верхнее веко; кошкам — в область внутренней поверхности уха курам — в бородку; индейкам -в подчелюстную сережку; гусям, уткам- в подчелюстную складку; фазанам -самцам -в кавернозные тела головы; павлинам, попугаям, голубям, журавлям, цаплям, аистам, фламинго- в область наружной стороны голени на 1. . . 2 см выше голеностопного сустава. • Перед введением туберкулина шерсть (волос) в месте инъекции выстригают (перья выщипывают), кожу обрабатывают 70%-ным этиловым спиртом.

ДИАГНОСТИКА

ДИАГНОСТИКА • Читку реакции на внутрикожное введение туберкулина проводят у крупного рогатого скота, буйволов, зебувидного скота, верблюдов и оленей через 72 ч; у коз, овец, свиней, собак, кошек, обезьян, пушных зверей через 48 ч; у птицы через 30− 36 ч. В неблагополучных по туберкулезу пунктах крупному рогатому скоту и верблюдам допускается вводить туберкулин повторно через 72 ч после первого введения в той же дозе и в то же место. Учет и оценку реакции на повторное введение проводят через 24 ч.

ДИАГНОСТИКА • При учете внутрикожной реакции у каждого исследуемого животного пальпируют место введения туберкулина, у норок визуально сравнивают веки левого и правого глаза. • При обнаружении во время читки утолщения кожи на месте введения туберкулина у крупного рогатого скота, буйволов, зебувидного скота, верблюдов, оленей берем кутиметр и измеряем толщину складки в миллиметрах и определяем величину ее утолщения, сравнивая ее с толщиной складки неизмененной кожи вблизи места введения туберкулина.

ДИАГНОСТИКА • Животных считают реагирующим на туберкулин: • крупный рогаты скот (кроме быков), буйволов, зебувидных, верблюдов, оленей, маралов, антилоп — при утолщении кожной складки на 3 мм и более независимо от характера припухлости (отечности, болезненности, повышения местной температуры); • быков, овец, коз, слонов, носорогов, бегемотов, свиней, собак, волков и других представителей хищных, птиц, дельфинов, кошек — при образовании припухлости в месте введения туберкулина.

ДИАГНОСТИКА

ДИАГНОСТИКА • Внутрикожная туберкулиновая проба — высокоспецифическая реакция на туберкулез. В то же время она зависит от общей иммунореактивности организма. У старых, глубокостельных, у животных имеющих низкую упитанность, а также при генерализованном туберкулезном процессе реакция на туберкулез может быть выражена слабо или отсутствовать совсем (анергия). • Ветспециалисты проводящие туберкулинизацию, должны иметь в виду, что иногда возможны неспецифические (пара — и псевдоаллергические) реакции на туберкулин для млекопитающих, обусловленные сенсибилизацией организма микобактериями птичьего вида, возбудителями паратуберкулеза и атипичными микобактериями, а также другими причинами.

ДИАГНОСТИКА • . Для дифференциации неспецифических реакций применяется симультанная аллергическая проба, которую проводят одновременно туберкулином для млекопитающих и комплексным аллергеном из атипичных бактерий (КАМ). Если при читке реакции внутрикожная реакция на введение КАМ выражена более интенсивно, чем на туберкулин для млекопитающих, реакцию ветспециалисты считают неспецифической, материал от таких животных исследуют на туберкулез лабораторными методами.

ДИАГНОСТИКА • Туберкулинизацию глазным методом (офтальмопробу) применяют для диагностики туберкулеза у лошадей и других представителей непарнокопытных. • У крупного рогатого скота этот метод можно применять только одновременно с внутрикожной туберкулиновой пробой для дополнительного выявления зараженных животных в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах или при отборе животных для диагностического убоя. Диагноз на туберкулез при патологоанатомическом исследовании наиболее часто подтверждается у животных, реагирующих одновременно при исследовании в каждой из проб.

ДИАГНОСТИКА • Глазную туберкулинизацию проводят двухкратно с интервалом 5− 6 суток между введениями. Туберкулин в количестве 3− 5 капель наносят пипеткой или шприцом без иглы на конъюктиву нижнего века или на поверхность роговицы при оттянутом нижнем веке. • Животным, реагировавшим на первое введение туберкулина, препарат повторно не вводят. • Учет результатов офтальмопробы проводят через 6, 9, 12, и 24 часа после первого и 3, 6, 9 и 12 часов после повторного введения туберкулина. Положительная реакция характеризуется образованием слизисто-гнойного или гнойного секрета, накапливающегося в конъюктивальном мешке или вытекающего в виде шнура из внутреннего угла глаза, гиперемией и отеком конъюктивы. При учете реакции необходимо оттягивать нижнее веко и осматривать конъюктивальный мешок, так как реакция может ограничится кратковременным образованием гнойного секрета в виде зернышек.

ДИАГНОСТИКА • Кратковременная гиперемия и слезотечение с образованием небольшого количества слизистого секрета, а также отсутствие каких-либо изменений оценивается как отрицательная реакция. • Если проведении плановой туберкулинизации в благополучном хозяйстве впервые выявляются реагирующие на туберкулин животные, то с целью уточнение диагноза под контролем специалистов госветсети проводится комиссионный диагностический убой 3− 5 животных с наиболее ярко выраженными реакциями на туберкулин и осматривают внутренние органы и лимфатические узлы. При обнаружении хотя бы у одного из убитых животных патологических изменений, типичных для туберкулеза, диагноз считается установленным.

ДИАГНОСТИКА • Если у убитых животных свойственные туберкулезу изменения органов и тканей не обнаружены, берут материал для бактериологического исследования с постановкой биопробы. При выделении из материала от убитых животных микобактерий туберкулеза бычьего или человеческого видов или при положительной биопробе диагноз также считают установленным;

Методы диагностики вирусных заболеваний • Метод иммунной электронной микроскопии – специфичный, чувствительный и надежный метод. В основе лежит взаимодействие антител (Ат) с вирусами при смешивании материала со специфической сывороткой. В результате образуются микропреципитаты, состоящие из вирусных частиц, покрытых «венчиком» (метод громоздкий и не применяется для массовых исследований). • Вирусологический – выделение и идентификация вирусов с использованием клеточных культур или куриных эмбрионов, заражением лабораторных живот

СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ЖИВОТНЫХ • Культивирование вирусов в куриных эмбрионах(ГРИПП) • Культивирование вирусов в тканевых культурах(инфекционный ринторахеит крс)

Основные методы индикации вирусов в культуре тканей • • 1. “+” гемагглютинация; 2. “+” гемадсорбция; 3. реакция нейтрализации вирусов в культуре тканей; 4. цветная реакция Солка

РН

РН

ДИАГНОСТИКА • Реакция гемагглютинации – склеивание эритроцитов при добавлении вирусосодержащего материала (есть вирус – эритроциты оседают в виде “зонтика”; нет вируса – в виде “диска”). • Реакция гемадсорбции – адсорбция эритроцитов на поверхности пораженных вирусом клеток и образуют характерные скопления (вирус гриппа– вызывает агглютинацию эритроцитов островкового типа). Цветная реакция Солка – основана на изменении цвета питательной среды. В результате жизнедеятельности клеток в питательную среду выделяются продукты клеточного метаболизма и происходит сдвиг р. Н в кислую сторону, о чем свидетельствует изменение цвета среды из красного в желтый. Если вирус присутствует и реплицируется в культуре, то вследствие разрушающего действия вируса клетки дегенерируются, и подавляется их метаболизм, т. е. цвет среды не изменяется

Методы идентификации вирусов: • нейтрализации цитопатического действия (ЦПД); • нейтрализация реакции гемадсорбции; • торможение реакции гемагглютинации; • ПЦР

РТГА

ФЕНОМЕН ГА

ИММУНОБЛОТИНГ • Вестерн иммуноблотинг используется для выявления антимикробных, антивирусных и противогрибковых антител. С этой целью очищенные белки (бактерий, вирусов, грибов) разделяют путем электрофореза в полиакриламидном геле.

ИММУНОБЛОТИНГ

ПЦР

ПЦР • В основе метода ПЦР лежит комплементарное достраивание ДНК матрицы, осуществляемое in vitro с помощью фермента ДНК-полимеразы. Эта реакция носит название репликации ДНК. Естественная репликация ДНК включает в себя несколько стадий: • 1) Денатурация ДНК (расплетение двойной спирали, расхождение нитей ДНК); • 2) Образование коротких двухцепочечных участков ДНК (затравок, необходимых для инициации синтеза ДНК); • 3) Синтез новой цепи ДНК (комплементарное достраивание обеих нитей).

ПЦР

Амплификатор ICycler IQ-5 (Bio-Rad, США) – прибор с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени»

Показания к применению метода ПЦР при различных заболеваниях. • 1. Применение ПЦР в урогинекологической практике. • 2. Применение в неопатологии. • 3. Применение ПЦР в практике службы крови. • 4. Применение ПЦР в пульмонологии и фтизиатрии. • 5. Применение ПЦР в клинике инфекционных заболеваний. • 6. Применение ПЦР в иммунологии. • 7. Применение ПЦР в онкологии

ПЦР • Использование метода ПЦР для диагностики инфекционных заболеваний как бактериальной, так и вирусной природы имеет колоссальное значение для решения многих проблем микробиологии и эпизоотологии. Применение этого метода также способствует развитию фундаментальных исследований в области изучения хронических и малоизученных инфекционных заболеваний. Однако следует отметить, что метод ПЦР лишь дополняет спектр традиционных методов. Используемых в микробиологической диагностике. Наиболее рационально и эффективно применение ПЦР для обнаружения микроорганизмов трудно культивируемых в лабораторных условиях, атипичных форм бактерий. К ним также относятся внутриклеточные паразиты и микроорганизмы, способные длительно персистировать в организме хозяина.

ИММУНОФЕНОТИПИРОВАНИЕ С ПОМОЩЬЮ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ • Для определения Т-лимфоцитов, Влимфоцитов

ИФА • Анализ крови методом ИФА позволяет определять антитела или антигены в пробе крови пациента. Это исследование применяется для определения содержания иммуноглобулинов, гормонов, а также иммунологических комплексов.

ИФА

Фотометр для микропланшет Модель 680

Благодарю за внимание!